PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407117

Übersicht

PALM2-AKAP2 ist ein menschliches Fusionsgen, das für ein chimäres Protein kodiert, das Eigenschaften von Paralemmin-2 (PALM2) – einem membranassoziierten Phosphoprotein, das mit Aktin-Remodellierung und Neuritenauswachsung in Verbindung gebracht wird – mit A‑Kinase-Ankerprotein 2 (AKAP2) kombiniert, einem Gerüstprotein, das die cAMP-abhängige Proteinkinase-A-(PKA)-Signalübertragung räumlich organisiert. Indem Kinase- und Phosphataseaktivitäten an definierte subzelluläre Mikrodomänen gebunden werden, ist PALM2-AKAP2 dazu positioniert, kompartimentierte cAMP/PKA-Signale, die Zytoskelettdynamik und den Membrantransport zu beeinflussen. Eine veränderte Expression oder genomische Umlagerungen unter Einbeziehung dieses Lokus wurden im Zusammenhang mit fehlregulierter Signalübertragung sowie Veränderungen der zellulären Architektur untersucht, die für die Krebsbiologie und neuroentwicklungsbezogene Prozesse relevant sind. Als gerüstverknüpfter Signalknoten ist es nützlich, um zu erforschen, wie lokalisierte Kinasesignale mit Programmen für Adhäsion, Motilität und Morphologie integriert werden.

Das PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PALM2-AKAP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PALM2-AKAP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PALM2-AKAP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PALM2-AKAP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PALM2-AKAP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PALM2-AKAP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PALM2-AKAP2-Exone abzielen, die für die PALM2-AKAP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PALM2-AKAP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PALM2-AKAP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PALM2-AKAP2 HDR-Plasmid (h) und PALM2-AKAP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PALM2-AKAP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PALM2-AKAP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.