PAK5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404073

Übersicht

PAK5 (p21-aktivierte Kinase 5) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die nachgeschaltet von GTPasen der Rho-Familie wie Cdc42 und Rac aktiviert wird und Signale integriert, die den Umbau des Zytoskeletts, das Neuritenauswachsen und das Zellüberleben regulieren. Sie lokalisiert an Mitochondrien und in weitere subzelluläre Kompartimente, wo sie die apoptosisbezogene Signalübertragung und Stressantworten beeinflussen kann. PAK5 ist an Signalwegen beteiligt, die Zellmotilität und Polarität steuern, indem sie zytoskelettale und Signalintermediate phosphoryliert und so extrazelluläre Reize mit Veränderungen in Adhäsion und Migration verknüpft. Eine fehlregulierte PAK5-Aktivität oder -Expression wurde in mehreren Krebskontexten mit aberranter Proliferation, Invasion und Phänotypen der Therapieresistenz in Verbindung gebracht und ist aufgrund ihrer Rollen in der neuronalen Entwicklung und synaptischen Funktion auch für die Neurobiologie relevant.

Das PAK5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PAK5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PAK5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PAK5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAK5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PAK5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAK5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PAK5-Exone abzielen, die für die PAK5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PAK5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAK5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PAK5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PAK5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAK5 HDR-Plasmid (h) und PAK5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PAK5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PAK5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.