Plasmide CRISPR/Cas9 KO Paf1 (h): sc-417797

Présentation

PAF1 code pour Paf1, une sous-unité centrale du complexe PAF1 (PAF1C) associé à l’ARN polymérase II, qui coordonne l’élongation de la transcription avec le traitement co‑transcriptionnel des ARN et la régulation de la chromatine. Grâce à ses interactions avec Pol II et la machinerie d’élongation, PAF1C influence la pause proximale au promoteur, la formation de l’extrémité 3′ des ARNm et le dépôt de marques d’histones associées à une transcription active, notamment la méthylation de H3K4 et de H3K36. Paf1 contribue à la stabilité du génome en modulant les conflits transcription–réplication et les réponses aux dommages de l’ADN, et participe au contrôle du cycle cellulaire et des programmes de différenciation. Une activité dérégulée de PAF1C et une expression altérée de PAF1 ont été associées à des programmes transcriptionnels aberrants observés dans de nombreux cancers et d’autres maladies impliquant une dérégulation épigénétique et transcriptionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Paf1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PAF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PAF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PAF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Paf1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PAF1 pour l'étude de la signalisation de Paf1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PAF1 essentiels à la fonction de Paf1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PAF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Paf1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Paf1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PAF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Paf1 plasmide HDR (h) et le Paf1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PAF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PAF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.