Particules Lentivirales d'Activation (m) PADI4: sc-422177-LAC

Le gène murin *Padi4* code la peptidyl-arginine désiminase 4 (PADI4), une enzyme dépendante du calcium qui catalyse la citrullination de résidus d’arginine sur les histones et d’autres protéines nucléaires. Par cette modification post-traductionnelle, PADI4 influence l’architecture de la chromatine, la régulation transcriptionnelle et le contrôle épigénétique de programmes d’état cellulaire dans des contextes immunitaires et épithéliaux. L’activité de PADI4 est liée aux voies de signalisation de l’immunité innée et aux processus inflammatoires, notamment via la régulation de la formation des pièges extracellulaires des neutrophiles (NET) et la modulation de l’expression de gènes répondant aux cytokines. Une citrullination dérégulée a été associée à l’auto-immunité et à des mécanismes de maladies inflammatoires, faisant de *Padi4* une cible utile pour disséquer les voies reliant le remodelage de la chromatine à l’activation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales PADI4 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Padi4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PADI4 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Padi4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PADI4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Padi4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.