PACAP Double Nickase Plasmid (h): sc-402741-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PACAP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PACAP Double-Nickase-Plasmid (h) und PACAP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADCYAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PACAP: sc-166180
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PACAP Double Nickase Plasmid (h) | sc-402741-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PACAP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402741-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADCYAP1 kodiert das hypophysäre Adenylatcyclase-aktivierende Polypeptid (PACAP), ein Neuropeptid, das vor allem über PAC1 (ADCYAP1R1) und die VPAC-Rezeptoren signalisiert, um cAMP/PKA, PLC/Ca²⁺ sowie nachgeschaltete, durch CREB und MAPK regulierte Transkriptionsprogramme zu aktivieren. PACAP moduliert die neuronale Erregbarkeit, die neuroendokrine Sekretion und stressresponsive Schaltkreise; zudem beeinflusst es über GPCR-vermittelte Signalgebung Immun- und Gefäßfunktionen. In zellulären Modellen überschneidet sich die ADCYAP1-Aktivität mit Signalwegen, die synaptische Plastizität, metabolische Homöostase und den neuroinflammatorischen Tonus steuern. Eine fehlregulierte PACAP-Signalgebung wurde mit neurologischen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter veränderte Stress- und Schmerzverarbeitung sowie migränebezogene Mechanismen, was ADCYAP1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien der GPCR‑Neuropeptid-Biologie macht.
PACAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADCYAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADCYAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADCYAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADCYAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.