PACAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r): sc-437378

Übersicht

Das Hypophysen-Adenylatcyclase-aktivierende Polypeptid (PACAP; Adcyap1) ist ein konserviertes Neuropeptid, das hauptsächlich über den PAC1-Rezeptor signalisiert und zudem VPAC-Rezeptoren aktivieren kann, um cAMP/PKA- und MAPK/ERK-abhängige Transkription zu regulieren. In den nervösen und neuroendokrinen Systemen der Ratte moduliert PACAP die neuronale Erregbarkeit, die Neurotransmitterfreisetzung, die Signalübertragung der Stressachse sowie Entwicklungsprogramme einschließlich Neuritenauswuchs und Zellüberleben. Die durch PACAP ausgelöste Signalübertragung überschneidet sich mit der Calcium-Homöostase, synaptischer Plastizität und der Regulation entzündlicher Mediatoren und verknüpft diesen Signalweg damit mit Mechanismen, die für Schmerzverarbeitung, stressbezogene Verhaltensweisen und Neuroinflammation relevant sind. Eine fehlregulierte PACAP-Aktivität wurde mit veränderter autonomer und metabolischer Kontrolle in Verbindung gebracht und in Modellen migräneähnlicher Phänotypen sowie einer erhöhten Anfälligkeit für Neurodegeneration untersucht.

Das PACAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in rat-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PACAP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PACAP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die PACAP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PACAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) und vom PACAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PACAP HDR-Plasmid (r) und PACAP HDR-Plasmid (r2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.