PACAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419000

Übersicht

Adcyap1 kodiert das hypophysäre Adenylatzyklase-aktivierende Polypeptid (PACAP), ein konserviertes Neuropeptid, das seine Signale überwiegend über PAC1 (ADCYAP1R1) und verwandte GPCRs der Klasse B vermittelt und dabei cAMP/PKA-, MAPK/ERK- sowie intrazelluläre Ca²⁺-Signalwege reguliert. In Mausgeweben moduliert PACAP die Neurotransmission, die neuronale Entwicklung, die neuroendokrine Sekretion und zelluläre Stressantworten; es beeinflusst synaptische Plastizität, zirkadiane und hypothalamische Homöostase sowie die autonome Regulation. Die PACAP-Signalgebung greift zudem in entzündliche und metabolische Programme ein, indem sie die Zytokinfreisetzung und Überlebenssignale von Zellen in neuronalen und peripheren Kompartimenten mitsteuert. Eine dysregulierte ADCYAP1/PACAP-Achse wurde in der Literatur mit stressbezogener Neurobiologie, Schmerzverarbeitung und neuroinflammatorischen Mechanismen in Verbindung gebracht und stützt damit mechanistische Studien in Kontexten des Nervensystems und mit Immunbezug.

Das PACAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adcyap1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adcyap1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adcyap1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PACAP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adcyap1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PACAP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adcyap1-Exone abzielen, die für die PACAP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adcyap1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PACAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PACAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adcyap1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PACAP HDR-Plasmid (m) und PACAP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adcyap1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adcyap1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.