P5CR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406048

Übersicht

PYCR2 kodiert die Pyrrolin-5-Carboxylat-Reduktase 2 (P5CR2), ein mitochondriales Enzym, das die NAD(P)H-abhängige Reduktion von Pyrrolin-5-Carboxylat zu Prolin katalysiert und damit die Prolinbiosynthese sowie das zelluläre Redoxgleichgewicht unterstützt. Diese Aktivität verknüpft den Aminosäurestoffwechsel mit der mitochondrialen Funktion, Reaktionen auf oxidativen Stress und der Aufrechterhaltung der Proteostase über Prolin-abhängiges Cycling sowie die Homöostase von NADP+/NADPH. Störungen von PYCR2 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und mitochondrial bedingten zellulären Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zur metabolischen Kontrolle im Nervensystem relevant macht. PYCR2 wird daher häufig in Signal- und Stoffwechselwegen untersucht, die mitochondrialen Stoffwechsel, Stressanpassung und Wachstumsregulation miteinander verbinden.

Das P5CR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PYCR2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PYCR2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PYCR2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P5CR2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PYCR2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P5CR2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PYCR2-Exone abzielen, die für die P5CR2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PYCR2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P5CR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P5CR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PYCR2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P5CR2 HDR-Plasmid (h) und P5CR2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PYCR2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PYCR2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.