p57 Kip2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400444-NIC

CDKN1C kodiert den cyclinabhängigen Kinaseinhibitor p57^Kip2, einen zentralen negativen Regulator des G1/S-Übergangs, der die CDK-Aktivität dämpft, um den Austritt aus dem Zellzyklus durchzusetzen und die Differenzierung zu unterstützen. Als geprägtes (imprintetes) Gen, das überwiegend vom mütterlichen Allel exprimiert wird, trägt CDKN1C zur Koordination von Entwicklungswachstumsprogrammen und zur Gewebehomöostase bei und greift in Signalwege ein, die Proliferation, Apoptose und Linienfestlegung steuern. Eine veränderte CDKN1C-Expression oder -Funktion geht mit einer gestörten Wachstumskontrolle einher und wurde mit entwicklungsbedingten Überwuchsphänotypen sowie mit der Tumorbiologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Zellzyklus-Checkpoints macht. In menschlichen Zellen ist p57^Kip2 zudem mit seneszenzähnlichen Zuständen und kontextabhängigen Antworten auf mitogene Signale und Stress verknüpft.

p57 Kip2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDKN1C-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDKN1C abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDKN1C-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDKN1C-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.