p53R2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402192

Übersicht

RRM2B kodiert p53R2, eine durch p53 induzierbare kleine Untereinheit der Ribonukleotidreduktase, die Desoxyribonukleotide für die DNA-Synthese und -Reparatur bereitstellt, insbesondere unter Stressbedingungen. p53R2 unterstützt die Erhaltung der mitochondrialen DNA und trägt zur Redoxhomöostase sowie zum Zellüberleben bei Replikationsstress bei, indem es die dNTP-Pools aufrechterhält. Funktionell verknüpft es die DNA-Schadensantwort, die p53-Signalgebung und den Nukleotidstoffwechsel und beeinflusst dadurch Genomstabilität und Checkpoint-Kontrolle. Eine Fehlregulation von RRM2B wurde mit Phänotypen der mitochondrialen DNA-Depletion und mit krebsassoziierter Stressanpassung in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Genomerhaltung und metabolischen Umprogrammierung relevant macht.

Das p53R2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RRM2B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RRM2B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RRM2B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p53R2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RRM2B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p53R2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RRM2B-Exone abzielen, die für die p53R2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RRM2B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p53R2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom p53R2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RRM2B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p53R2 HDR-Plasmid (h) und p53R2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RRM2B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RRM2B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.