Plasmide CRISPR/Cas9 KO P4HA1 (h): sc-407173

Présentation

P4HA1 code la sous-unité alpha catalytique de la prolyl-4-hydroxylase, une enzyme clé résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui hydroxyle les résidus proline du procollagène afin de favoriser la stabilité de la triple hélice et la maturation de la matrice extracellulaire. En régulant la biosynthèse et le dépôt du collagène, P4HA1 influence le remodelage de la matrice, l’adhésion cellule–matrice et la rigidité tissulaire, des processus en interaction avec les programmes de réponse à l’hypoxie et l’adaptation métabolique. Une activité altérée de P4HA1 a été associée à des phénotypes fibrosants et au remodelage du microenvironnement tumoral, où l’organisation de la matrice extracellulaire peut influencer l’invasion et la signalisation stromale. Par conséquent, P4HA1 est fréquemment étudié dans des voies liées à la fibrillogenèse du collagène, au traitement des protéines dans le RE et à la régulation du comportement cellulaire induite par la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P4HA1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène P4HA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du P4HA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert P4HA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P4HA1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en P4HA1 pour l'étude de la signalisation de P4HA1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de P4HA1 essentiels à la fonction de P4HA1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de P4HA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P4HA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P4HA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus P4HA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P4HA1 plasmide HDR (h) et le P4HA1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie P4HA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles P4HA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.