Plásmido Doble Nickase (h) p47phox: sc-417916-NIC

NCF1 codifica p47phox, una subunidad organizadora citosólica del complejo NADPH oxidasa de los fagocitos (NOX2) que regula el ensamblaje dependiente de estímulos de los componentes de membrana y citosólicos para generar especies reactivas de oxígeno (ROS). La fosforilación de p47phox y su translocación a la membrana ayudan a coordinar la transferencia de electrones desde el NADPH al oxígeno, lo que sustenta las respuestas de estallido oxidativo, la señalización redox y la eliminación de microorganismos en células mieloides. La alteración de la función de NCF1 perturba la homeostasis de ROS y se ha relacionado con fenotipos de inmunodeficiencia y desregulación inflamatoria, incluida la susceptibilidad a cuadros similares a la enfermedad granulomatosa crónica. Además, variantes de NCF1 se han asociado con vías autoinmunes y autoinflamatorias, lo que convierte a p47phox en un nodo útil para estudiar la señalización inmunitaria innata y la regulación dependiente del estado redox.

p47phox El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NCF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NCF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NCF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NCF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.