P2Y5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405189

Übersicht

LPAR6 (auch als P2Y5 bekannt) kodiert einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der auf Lysophosphatidsäure reagiert und über heterotrimere G‑Proteine die intrazelluläre Signalübertragung reguliert. Die P2Y5‑Aktivität beeinflusst Rho/ROCK‑ und MAPK‑verknüpfte Signalwege und koordiniert kontextabhängig den Umbau des Zytoskeletts, die Zell‑Zell‑Adhäsion und die Zellbeweglichkeit. Der Rezeptor ist besonders in der Biologie der Haut und der Haarfollikel relevant; veränderte LPAR6‑Signalgebung wird mit angeborenen Störungen des Haarwachstums sowie mit weiter gefassten Phänotypen der epithelialen Homöostase in Verbindung gebracht. Darüber hinaus überschneidet sich die LPAR6‑vermittelte Lipidsignalgebung mit Entzündungs‑ und Barriereprozessen, was sie für mechanistische Studien in Keratinozyten und anderen epithelialen Modellen bedeutsam macht.

Das P2Y5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LPAR6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LPAR6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LPAR6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P2Y5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LPAR6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P2Y5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LPAR6-Exone abzielen, die für die P2Y5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LPAR6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P2Y5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom P2Y5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LPAR6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P2Y5 HDR-Plasmid (h) und P2Y5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LPAR6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LPAR6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.