P2Y2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422096

Übersicht

P2ry2 kodiert den murinen P2Y2-Rezeptor, einen G‑Protein‑gekoppelten purinergen Rezeptor, der durch extrazelluläres ATP und UTP aktiviert wird. Die P2Y2-Signalübertragung koppelt vorwiegend an Gq/11 und stimuliert dadurch die Phospholipase C, die Bildung von Inositolphosphaten, die Mobilisierung intrazellulären Ca²⁺ sowie die nachgeschaltete Aktivierung der MAPK- und PI3K/AKT-Signalwege, wodurch transkriptionelle und zytoskelettale Antworten geprägt werden. Über die Regulation von Ionentransport, Chemotaxis und Sekretion trägt P2Y2 zur Physiologie epithelialer Barrieren, zu endothelialen Reaktionen und zur angeborenen Immun-Signalgebung in entzündlichen Mikromilieus bei. Eine fehlregulierte purinerge Signalübertragung unter Beteiligung von P2Y2 wurde mit Entzündungen der Atemwege und des Darms, fibroseassoziiertem Remodelling sowie tumorassoziierten Interaktionen zwischen Stroma und Immunzellen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zu Krankheitsmechanismen unterstreicht.

Das P2Y2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des P2ry2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des P2ry2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von P2ry2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die P2Y2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von P2ry2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der P2Y2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf P2ry2-Exone abzielen, die für die P2Y2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere P2ry2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom P2Y2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom P2Y2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des P2ry2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das P2Y2 HDR-Plasmid (m) und P2Y2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von P2ry2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten P2ry2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.