P2Y12 Double Nickase Plasmid (m): sc-427818-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das P2Y12 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- P2Y12 Double-Nickase-Plasmid (m) und P2Y12 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf P2ry12 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
P2Y12 Double Nickase Plasmid (m) | sc-427818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y12 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-427818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *P2ry12* kodiert den purinergen Rezeptor P2Y12, einen Gi-gekoppelten GPCR, der extrazelluläres ADP erkennt, um die cAMP-Signalübertragung zu dämpfen und nachgeschaltete PI3K–Akt- und MAPK-Antworten zu koordinieren. Im zentralen Nervensystem ist P2Y12 stark in Mikroglia angereichert, wo es als Reaktion auf purinerge Signale, die von gestressten oder geschädigten Zellen freigesetzt werden, die Motilität der Zellfortsätze, Chemotaxis und Überwachungs-/Surveillance-Verhalten reguliert. Eine P2Y12-abhängige Signalgebung beeinflusst die neuroimmune Kommunikation, den synaptischen Umbau und den Entzündungstonus, wodurch *P2ry12* zu einem häufig verwendeten molekularen Marker und funktionellen Knotenpunkt der Mikroglia-Biologie wird. Eine fehlregulierte purinerge Signalübertragung über P2Y12 wurde in Modellen von Neuroinflammation und Neurodegeneration mit veränderten Mikroglia-Aktivierungszuständen in Verbindung gebracht.
P2Y12 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des P2ry12-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von P2ry12 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die P2ry12-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit P2ry12-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.