P2X7 Double Nickase Plasmid (m): sc-422093-NIC

Das Mausgen **P2rx7** kodiert den ATP-gesteuerten Kationenkanal **P2X7**, einen trimeren purinergen Rezeptor, der als Reaktion auf hohe extrazelluläre ATP-Konzentrationen den Einstrom von Na⁺ und Ca²⁺ sowie den Ausstrom von K⁺ vermittelt. Die P2X7-Signalgebung unterstützt die Aktivierung des Inflammasoms, die Prozessierung von IL‑1β, die Permeabilisierung der Zellmembran und nachgeschaltete Entzündungswege einschließlich NLRP3, MAPK und NF‑κB und beeinflusst dadurch Zytokinfreisetzung und Zelltodprogramme. In Immun- und Gliazellen trägt P2X7 dazu bei, gefahrenassoziierte ATP-Signale mit der Aktivierung von Mikroglia, Effektorfunktionen von Makrophagen sowie der Regulation von Proliferation und Apoptose zu koppeln. Eine fehlregulierte P2X7-Aktivität wird mit Neuroinflammation, autoimmuner Pathologie, Mechanismen chronischer Schmerzen und tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht, wodurch **P2rx7** ein breit untersuchtes Ziel in Modellen der Immunologie und Neurowissenschaften darstellt.

P2X7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des P2rx7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von P2rx7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die P2rx7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit P2rx7-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.