Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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P2X7 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422093-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- P2X7 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- P2X7ダブルニカースプラスミド（m）およびP2X7ダブルニカースプラスミド（m2）は、P2rx7を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: P2X7 抗体 (D-1): sc-514962
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
P2X7 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422093-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2X7 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422093-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのP2rx7は、ATPによってゲートされるカチオンチャネルP2X7をコードしており、高濃度の細胞外ATPに応答してNa⁺およびCa²⁺の流入とK⁺の流出を媒介する、三量体のプリン作動性受容体である。P2X7シグナルは、インフラマソームの活性化、IL-1βのプロセシング、膜透過性の亢進を支えるほか、NLRP3、MAPK、NF-κBなどの下流炎症経路を介してサイトカイン放出や細胞死プログラムにも影響を与える。免疫細胞およびグリア細胞においてP2X7は、危険関連シグナルとしてのATPをミクログリア活性化、マクロファージのエフェクター機能、ならびに増殖・アポトーシスの制御へと結び付ける役割を担う。P2X7活性の制御破綻は、神経炎症、自己免疫性病態、慢性疼痛の機序、腫瘍随伴性炎症に関与するとされ、P2rx7は免疫学および神経科学モデルで広く研究対象となっている。
P2X7 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における P2rx7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、P2rx7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、P2rx7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、P2rx7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。