Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
P2X7 Double Nickase Plasmid (h): sc-400780-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das P2X7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- P2X7 Double-Nickase-Plasmid (h) und P2X7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf P2RX7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: P2X7: sc-514962
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
P2X7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400780-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2X7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400780-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **P2RX7** kodiert den purinergen Rezeptor **P2X7**, einen durch ATP gesteuerten Kationenkanal, der extrazelluläre Gefahrensignale mit Ionenfluss, Membranpermeabilisierung und nachgeschalteten Entzündungsreaktionen koppelt. Die Aktivierung von P2X7 fördert den Ca²⁺-/Na⁺-Einstrom und den K⁺-Ausstrom und unterstützt dadurch die Aktivierung des **NLRP3-Inflammasoms**, die Reifung von **IL‑1β** sowie die **Pyroptose**; zugleich beeinflusst sie die ROS-Bildung, Autophagie und metabolische Anpassung. Über diese Prozesse verknüpft P2X7 die purinerge Signalübertragung mit der Aktivierung von Immunzellen, der Zytokinfreisetzung und Zelltodwegen in myeloiden und lymphoiden Kompartimenten. Eine Fehlregulation der P2RX7-Aktivität und -Signalgebung wurde mit chronischer Entzündung, neuroinflammatorischen Prozessen und der Modulation des Tumor‑Immun‑Mikromilieus in Verbindung gebracht, was P2RX7 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der angeborenen Immunität und Stresssignalgebung macht.
P2X7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des P2RX7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von P2RX7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die P2RX7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit P2RX7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.