Plasmide CRISPR d'Activation (h) P2X7: sc-400780-ACT

Le gène humain **P2RX7** code le canal ionique **P2X7** activé par l’ATP, un récepteur purinergique trimérique qui régule le flux de cations, la dépolarisation membranaire et la formation prolongée de pores dans les cellules immunitaires et gliales. La signalisation de P2X7 couple la détection de l’ATP extracellulaire à l’activation de l’inflammasome, à la libération de cytokines et à des programmes de mort cellulaire régulée, en s’intégrant aux voies inflammatoires dépendantes de NF-κB, des MAPK et de NLRP3. Une activité altérée de P2X7 a été associée à une neuroinflammation dérégulée, à des états inflammatoires chroniques et au remodelage du microenvironnement tumoral–immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de l’inflammation stérile et de la signalisation liée au stress. En tant que récepteur de surface doté de lectures fonctionnelles robustes, **P2RX7** est fréquemment étudié dans des modèles d’activation des macrophages, de réponses microgliales et de dynamique de la signalisation purinergique.

P2X7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de P2RX7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P2X7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus P2RX7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription P2RX7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P2X7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus P2RX7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P2X7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P2X7 dans les cellules tumorales présentant une expression de P2RX7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.