P2X3 Double Nickase Plasmid (m): sc-432763-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das P2X3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- P2X3 Double-Nickase-Plasmid (m) und P2X3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf P2rx3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: P2X3: sc-390572
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
P2X3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432763-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2rx3 kodiert den P2X3-Rezeptor, einen durch ATP aktivierten trimeren Kationenkanal, der in peripheren sensorischen Neuronen besonders stark exprimiert wird und dort als Antwort auf extrazelluläre Nukleotide schnell depolarisierende Ströme vermittelt. Die Aktivität von P2X3 reguliert den Ca2+- und Na+-Einstrom, prägt die nozizeptive Neurotransmission und die neurogene Entzündung und ist in purinerge Signalnetzwerke eingebunden, die Erregbarkeit, synaptische Transmission und die Plastizität sensorischer Neuronen beeinflussen. In Mausmodellen wurde eine veränderte P2rx3-Funktion mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die entzündlichen und neuropathischen Schmerzzuständen zugrunde liegen, sowie mit viszeralen sensorischen Signalwegen, die für Blasen- und Atemwegsreflexe relevant sind. Dieses Ziel wird breit genutzt, um ATP-getriebene Signalübertragung in Hinterwurzelganglien, Trigeminusneuronen und verwandten sensorischen Schaltkreisen zu untersuchen.
P2X3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des P2rx3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von P2rx3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die P2rx3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit P2rx3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.