Plásmido CRISPR de Activación (h) P2X3: sc-402380-ACT

El gen humano **P2RX3** codifica el receptor **P2X3**, un canal catiónico activado por ATP altamente enriquecido en neuronas sensoriales periféricas, donde media corrientes despolarizantes rápidas y la entrada de calcio en respuesta a nucleótidos extracelulares. P2X3 participa en la neurotransmisión purinérgica e integra señales de inflamación y lesión tisular, conectando la liberación extracelular de ATP con la excitabilidad neuronal, la inflamación neurogénica y la comunicación sináptica en las vías sensoriales. La desregulación de la señalización de P2X3 se ha asociado con alteraciones en el procesamiento nociceptivo y con fenotipos de hipersensibilidad sensorial, lo que convierte a **P2RX3** en una diana útil para estudiar la activación neuronal evocada por estímulos y los mecanismos de circuitos relacionados con el dolor. Esta biología también es relevante para redes más amplias de señalización de canales iónicos y vías adyacentes a GPCR que convergen en MAPK, la transcripción dependiente de calcio y la modulación de la función de las neuronas sensoriales impulsada por citocinas.

P2X3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de P2RX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

P2X3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus P2RX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional P2RX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de P2X3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo P2RX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de P2X3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía P2X3 en células tumorales con expresión de P2RX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.