Plasmide Double Nickase (h) p19 INK4D/CDKN2D: sc-401761-NIC

CDKN2D code p19^INK4D, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines qui se lie préférentiellement à CDK4 et CDK6 afin de limiter la phosphorylation de RB1 dépendante de la cycline D et d’imposer le point de contrôle G1/S. En restreignant la transcription pilotée par E2F, p19^INK4D intègre des signaux antiprolifératifs aux programmes de sortie du cycle cellulaire et de différenciation, notamment dans les lignées hématopoïétiques et neuronales. La fonction de CDKN2D s’articule avec la signalisation mitogène RAS–MAPK et des voies sensibles au stress, qui convergent vers l’activité des CDK et le contrôle des checkpoints. Une régulation altérée de la famille INK4 et des composants de la voie RB est fréquemment impliquée dans une prolifération dérégulée à travers des modèles cellulaires pertinents pour les maladies, ce qui fait de CDKN2D un nœud utile pour étudier le contrôle du cycle cellulaire et les mécanismes de suppression de la croissance.

p19 INK4D/CDKN2D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN2D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.