p14ARF/p16 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400018-LAC

CDKN2A kodiert zwei Tumorsuppressorproteine, p16INK4a und p14ARF, die aus alternativen Leserastern entstehen und dadurch die Zellzyklusprogression begrenzen sowie Seneszenzprogramme koordinieren. p16INK4a hemmt CDK4/6 und hält RB1 in einem hypophosphorylierten Zustand, wodurch der E2F-abhängige Eintritt in die S‑Phase eingeschränkt wird; p14ARF stabilisiert hingegen TP53, indem es MDM2 antagonisiert, und fördert als Antwort auf onkogenen Stress einen Zellzyklusarrest oder Apoptose. Über diese Verknüpfungen mit der RB- und der p53-Achse integriert CDKN2A mitogene Signale mit Checkpoint-Kontrolle, DNA-Schadensantworten und altersassoziierten transkriptionellen Veränderungen. Eine veränderte Regulation von CDKN2A ist häufig mit dysregulierter Proliferation, beeinträchtigter Seneszenz und tumorigenen Phänotypen verbunden, was es zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und der Kontrolle von Zellschicksalen macht.

p14ARF/p16 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CDKN2A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

p14ARF/p16 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CDKN2A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen p14ARF/p16-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CDKN2A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.