Plasmide Double Nickase (h) p14ARF/p16: sc-400018-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) p14ARF/p16 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p14ARF/p16 Double Nickase (h) et le plasmide p14ARF/p16 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDKN2A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p14ARF Antibody (ARF 4C6/4): sc-53392
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) p14ARF/p16 | sc-400018-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) p14ARF/p16 | sc-400018-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN2A code deux protéines suppresseurs de tumeurs, p16INK4A et p14ARF, qui régulent la progression du cycle cellulaire et le contrôle des points de contrôle via des voies distinctes. p16 inhibe CDK4/6 afin de limiter la phosphorylation de RB et de verrouiller la transition G1–S, tandis que p14ARF s’oppose à MDM2 pour stabiliser p53 et favoriser l’arrêt du cycle cellulaire ou la sénescence en réponse à un stress oncogénique. Par ces connexions aux réseaux RB et p53, CDKN2A intègre les signaux prolifératifs à la surveillance du génome et est fréquemment altéré dans les études sur la transformation maligne. La perte ou le silençage de CDKN2A est largement étudié dans des contextes de prolifération dérégulée, d’échappement à la sénescence et de signalisation de réponse au stress altérée.
p14ARF/p16 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN2A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.