p120 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400943-ACT

CTNND1 kodiert p120-Catenin (p120), ein Armadillo-Repeat-Protein, das an die juxtamembranäre Region klassischer Cadherine bindet und Adherens Junctions stabilisiert, indem es Cadherin-Endozytose und -Umsatz begrenzt. Durch die Koordination von Cadherin–Catenin-Komplexen mit der Signalgebung von Rho-Familien-GTPasen beeinflusst p120 die Dynamik des Aktin-Zytoskeletts, die epitheliale Polarität und die kontaktabhängige Wachstumskontrolle und greift damit in Signalwege ein, die Zellmigration und Gewebemorphogenese regulieren. Eine veränderte CTNND1-Expression oder p120-Lokalisation wurde in Krebsmodellen mit gestörten Programmen der Zell-Zell-Adhäsion und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht; außerdem wird eine Beeinflussung von CTNND1 auch im Kontext von Entwicklungsstörungen untersucht, die die kraniofaziale Entwicklung und die Epithelbiologie betreffen.

p120 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTNND1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

p120 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTNND1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTNND1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen p120-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTNND1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von p120-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des p120-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTNND1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.