p107 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422614

Übersicht

Das murine Gen **Rbl1** kodiert das Retinoblastom-Familienprotein **p107**, einen Zellzyklusregulator, der den Übergang von **G1 nach S** durch Bindung an **E2F-Transkriptionsfaktoren** und die Koordination der **Cyclin-abhängigen Kinase-(CDK)-Signalgebung** bremst. p107 integriert mitogene Signale mit der transkriptionellen Kontrolle der DNA-Replikation und des Eintritts in die S-Phase und trägt zur Durchsetzung von Checkpoints sowie zu Programmen der zellulären Differenzierung bei. Als Bestandteil des RB-Signalwegs überschneidet sich die p107-Funktion mit pRB/p130-Netzwerken, um chromatinassoziierte Repression und Entscheidungen über Proliferation zu modulieren. Eine Fehlregulation der RB-Familienkontrolle und der E2F-Aktivität ist für Modelle der onkogenen Transformation ebenso breit relevant wie für Studien zu aberranter Proliferation und Lineage-Festlegung in Säugetiergeweben.

Das p107 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rbl1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rbl1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rbl1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die p107-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rbl1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der p107-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rbl1-Exone abzielen, die für die p107-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rbl1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom p107 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom p107 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rbl1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das p107 HDR-Plasmid (m) und p107 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rbl1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rbl1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.