Plasmide CRISPR/Cas9 KO P-Selectin/CD62P/SELP (h): sc-400441

Présentation

SELP code la P-sélectine (CD62P), un récepteur d’adhérence inductible stocké dans les granules α des plaquettes et dans les corps de Weibel-Palade des cellules endothéliales, puis rapidement exposé à la surface cellulaire après une stimulation inflammatoire ou thrombotique. La P-sélectine de surface se lie à PSGL‑1 sur les leucocytes pour permettre l’accrochage initial et le roulement sur un endothélium activé ainsi que les interactions plaquette–leucocyte, reliant la dynamique d’adhérence à une signalisation en aval qui soutient le recrutement leucocytaire et l’inflammation vasculaire. Cet axe s’inscrit dans les cascades d’adhérence médiées par les sélectines, l’activation plaquettaire et les voies inflammatoires associées à la coagulation, modulant l’activation endothéliale et le trafic des cellules immunitaires. Une expression ou une activité dérégulée de SELP est fréquemment étudiée dans des modèles de thrombose, d’athérosclérose, de lésion d’ischémie‑reperfusion et de maladies inflammatoires, où le dialogue croisé plaquettes–endothélium–leucocytes contribue à la pathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P-Selectin/CD62P/SELP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SELP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SELP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SELP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P-Selectin/CD62P/SELP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SELP pour l'étude de la signalisation de P-Selectin/CD62P/SELP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SELP essentiels à la fonction de P-Selectin/CD62P/SELP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SELP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le P-Selectin/CD62P/SELP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le P-Selectin/CD62P/SELP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SELP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le P-Selectin/CD62P/SELP plasmide HDR (h) et le P-Selectin/CD62P/SELP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SELP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SELP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.