Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickaseプラスミド (h): sc-404267-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- P/Q-type Ca++ CP α1Aダブルニカースプラスミド（h）およびP/Q-type Ca++ CP α1Aダブルニカースプラスミド（h2）は、CACNA1Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: P/Q-type Ca++ CP α1A 抗体 (C-2): sc-390004
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1Aは、P/Q型電位依存性カルシウムチャネル（CaV2.1）の孔形成サブユニットであるα1Aをコードしており、神経細胞における活動依存的なCa2+流入の主要な担い手です。チャネルの開口は、膜の脱分極を神経伝達物質放出へと結び付け、シナプス前終末のカルシウム微小ドメインやシナプス小胞のエキソサイトーシスを調節することで発火パターンを形成します。CaV2.1の活性は、カルモジュリン依存的な調節や、シナプス可塑性を微調整する下流のキナーゼ／ホスファターゼ・ネットワークなど、カルシウム依存性シグナル伝達経路と統合的に連携します。CACNA1Aの遺伝的変異や機能障害は、興奮性およびシナプス伝達の変化を伴う神経疾患の表現型と関連しており、神経回路機能の機序研究における標的としての有用性を支持します。
P/Q-type Ca++ CP α1A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CACNA1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CACNA1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CACNA1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CACNA1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。