Ox40 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423560-LAC

Il gene murino **Tnfrsf4** codifica **OX40** (CD134), una molecola costimolatoria della superfamiglia dei recettori del TNF, indotta sui linfociti T attivati e su alcuni sottotipi di cellule linfoidi innate. Il legame di OX40 con **OX40L** sostiene l’espansione clonale, la sopravvivenza e la differenziazione verso cellule della memoria dei linfociti T tramite una segnalazione dipendente da TRAF che attiva le vie **NF-κB**, **MAPK** e **PI3K/AKT** e modella i programmi citochinici. La segnalazione di OX40 modula l’equilibrio tra Treg ed effettori e contribuisce alle reazioni del centro germinativo e alle risposte anticorpali. Un’attività di OX40 disregolata è implicata nella fisiopatologia infiammatoria e autoimmune e nella regolazione immunitaria all’interno dei microambienti associati ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi di immunologia meccanicistica.

Le particelle di attivazione lentivirale Ox40 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tnfrsf4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Ox40 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tnfrsf4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Ox40. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tnfrsf4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.