Ox-LDL R-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402338-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ox-LDL R-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ox-LDL R-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Ox-LDL R-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf OLR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ox-LDL R-1: sc-66155
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ox-LDL R-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402338-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ox-LDL R-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402338-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OLR1 kodiert den Rezeptor 1 für oxidiertes Low-Density-Lipoprotein (Ox‑LDL R‑1), einen Scavenger-Rezeptor, der an der Zelloberfläche die Bindung und Internalisierung von oxidiertem LDL und anderen schädigungsassoziierten Liganden vermittelt. Die Signalübertragung über Ox‑LDL R‑1 fördert die Aktivierung des Endothels und Entzündungsreaktionen, indem sie Signalwege wie NF‑κB und MAPK einbindet und so die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies, die Expression von Adhäsionsmolekülen und die Rekrutierung von Leukozyten beeinflusst. Eine Fehlregulation der OLR1-Aktivität wird mit vaskulärer Entzündung und Phänotypen der Lipidverarbeitung in Verbindung gebracht, die für die Atherosklerose-Biologie relevant sind, und wird häufig in Modellen aus Endothelzellen, Makrophagen und glatten Muskelzellen untersucht. Als stressantwortender Rezeptor bietet OLR1 zudem einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie oxidative Signale immunmetabolische Programme und das Überleben von Zellen unter proinflammatorischen Bedingungen umgestalten.
Ox-LDL R-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des OLR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von OLR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die OLR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit OLR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.