Plasmide CRISPR/Cas9 KO OTULIN (m): sc-436617

Présentation

Otulin code OTULIN, une déubiquitinase qui hydrolyse de façon sélective les chaînes d’ubiquitine liées en Met1 (linéaires) générées par le complexe LUBAC, contribuant ainsi à façonner la propagation des signaux dépendants de l’ubiquitine. Dans les cellules de souris, OTULIN agit comme un régulateur négatif majeur de la voie NF-κB et de la signalisation inflammatoire en contrôlant l’ubiquitination linéaire de composants de la voie tels que RIPK1 et NEMO/IKBKG, influençant les réponses cytokiniques et les décisions de mort cellulaire. La perturbation d’OTULIN altère la protéostase et l’homéostasie immunitaire, reliant cette voie à des phénotypes auto-inflammatoires et à des mécanismes plus larges de maladies inflammatoires. OTULIN interfère également avec la signalisation de l’immunité innée et les réponses au stress, où l’édition de l’ubiquitine linéaire ajuste l’amplitude et la durée de la signalisation déclenchée par les récepteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OTULIN (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Otulin dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Otulin, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Otulin à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OTULIN.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Otulin pour l'étude de la signalisation de OTULIN, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Otulin essentiels à la fonction de OTULIN
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Otulin pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OTULIN plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OTULIN plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Otulin. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OTULIN plasmide HDR (m) et le OTULIN (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Otulin pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Otulin définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.