OTUB1 Double Nickase Plasmid (m): sc-430702-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das OTUB1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- OTUB1 Double-Nickase-Plasmid (m) und OTUB1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Otub1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: OTUB1: sc-130458
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
OTUB1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430702-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OTUB1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-430702-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Otub1 kodiert OTUB1, eine Deubiquitinase der Ovarian‑Tumor‑(OTU-)Familie, die die Architektur von Ubiquitinketten umgestaltet und ubiquitinabhängige Signalwege dämpft. OTUB1 reguliert Proteostase und Stressantworten, indem es K48‑ und K63‑verknüpfte Ubiquitinierung moduliert, und spielt gut beschriebene Rollen in der DNA‑Schadensantwort durch die Regulation von Ubiquitin-Signalen an Doppelstrangbrüchen. Durch die Steuerung des Durchsatzes ubiquitinvermittelter Signalwege beeinflusst OTUB1 die Zellzyklusprogression, die Genomstabilität und die Ausgänge inflammatorischer Signale. Eine fehlregulierte OTUB1‑Aktivität wurde mit aberranter Signalübertragung in krebsrelevanten Signalwegen sowie mit veränderten immunologischen und neurobiologischen Prozessen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung in Krankheitsmodellsystemen unterstützt.
OTUB1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Otub1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Otub1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Otub1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Otub1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.