OTOP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423421

Übersicht

Otop1 kodiert OTOP1, ein mehrfach die Membran durchspannendes Protein, das als protonenselektiver Ionenkanal fungiert und zur zellulären pH-Sensorik und -Regulation beiträgt. Bei der Maus ist die OTOP1-Aktivität mit der Vestibularphysiologie und der Biomineralisierung der Otolithen (Otokonien) verknüpft – Prozesse, die von streng kontrollierten ionischen Mikroumgebungen und der Ablagerung von Calciumcarbonat abhängen. Durch die Modulation des Protonenflusses über Membranen kann OTOP1 die Säure-Basen-Homöostase und nachgeschaltete Signalereignisse beeinflussen, die empfindlich auf extra- und intrazelluläre pH-Werte reagieren. Eine Fehlregulation der OTOP1-abhängigen Protonenhandhabung wurde mit Störungen des Gleichgewichts und der Innenohrfunktion in Verbindung gebracht, was OTOP1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Sinnesbiologie macht.

Das OTOP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Otop1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Otop1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Otop1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OTOP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Otop1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OTOP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Otop1-Exone abzielen, die für die OTOP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Otop1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OTOP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OTOP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Otop1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OTOP1 HDR-Plasmid (m) und OTOP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Otop1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Otop1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.