OTOP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423421

Descripción general

Otop1 codifica OTOP1, una proteína de membrana multipaso que funciona como un canal iónico selectivo para protones y contribuye a la detección y regulación del pH celular. En el ratón, la actividad de OTOP1 está vinculada a la fisiología vestibular y a la biomineralización de las otoconias, procesos que dependen de microambientes iónicos estrechamente controlados y de la deposición de carbonato de calcio. Al modular el flujo de protones a través de las membranas, OTOP1 puede influir en la homeostasis ácido-base y en eventos de señalización posteriores que son sensibles al pH extracelular e intracelular. La desregulación del manejo de protones dependiente de OTOP1 se ha asociado con defectos del equilibrio y de la función del oído interno, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la biología sensorial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OTOP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Otop1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Otop1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Otop1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OTOP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Otop1 para la investigación de la señalización de OTOP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Otop1 críticos para la función de OTOP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Otop1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OTOP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OTOP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Otop1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OTOP1 (m) y el plásmido HDR OTOP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Otop1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Otop1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.