osteocalcin Double Nickase Plasmid (h): sc-400299-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das osteocalcin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- osteocalcin Double-Nickase-Plasmid (h) und osteocalcin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BGLAP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: osteocalcin: sc-365797
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
osteocalcin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
osteocalcin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BGLAP kodiert Osteocalcin, ein vitamin‑K‑abhängiges, γ‑carboxyliertes extrazelluläres Matrixprotein, das von Osteoblasten sezerniert und während der Knochenmineralisierung in Hydroxylapatit eingebaut wird. Osteocalcin ist an Programmen der Osteoblastendifferenzierung und an Knochenumbauprozessen beteiligt, die mit RUNX2‑gesteuerter Transkription, der Ablagerung der Kollagenmatrix sowie der Calcium-/Phosphat‑Homöostase koordiniert sind. Eine veränderte BGLAP‑Expression oder eine gestörte Osteocalcin‑Reifung wird häufig als Readout des osteogenen Zustands verwendet und wurde mit einer dysregulierten Knochenumsatzrate bei Erkrankungen wie Osteoporose, Osteomalazie und tumorassoziierter Osteolyse in Verbindung gebracht. Als matrixassoziierter Marker unterstützt Osteocalcin mechanistische Studien zur Skelettentwicklung, zur Dynamik der Mineralisierung und zur Signalübertragung im Mikromilieu in Modellen der Knochenbiologie.
osteocalcin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BGLAP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BGLAP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BGLAP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BGLAP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.