OSM CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404957-ACT

Oncostatin M (OSM) ist ein pleiotropes Zytokin der IL-6-Familie, das vor allem über OSMR oder LIFR in Kombination mit gp130 signalisiert und dadurch Entzündungsprozesse, Gewebeumbau sowie die Wechselwirkungen zwischen hämatopoetischen und stromalen Zellen reguliert. Eine OSM-Stimulation aktiviert JAK/STAT‑ (insbesondere STAT3), MAPK/ERK‑ und PI3K/AKT‑Signalwege und verändert dadurch Transkriptionsprogramme, die Zellproliferation, Differenzierung, den Umsatz der extrazellulären Matrix und die Barrierefunktion beeinflussen. In der Humanbiologie wird eine fehlregulierte OSM‑Aktivität mit chronisch entzündlichen Mikromilieus und fibrotischem Remodeling in Verbindung gebracht; darüber hinaus ist sie relevant für tumorassoziiertes Stroma, angiogene Signalgebung und die Rekrutierung von Immunzellen. Diese Eigenschaften machen OSM zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung zytokingesteuerter transkriptioneller Netzwerke, parakriner Signalübertragung und der Kopplung von Signalwegen zwischen immunologischen und nicht‑immunologischen Kompartimenten.

OSM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OSM-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OSM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OSM-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OSM-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OSM-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OSM-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OSM-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OSM-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OSM-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.