OPN1SW Double Nickase Plasmid (h): sc-400755-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das OPN1SW Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- OPN1SW Double-Nickase-Plasmid (h) und OPN1SW Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf OPN1SW abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
OPN1SW Double Nickase Plasmid (h) | sc-400755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPN1SW Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1SW kodiert das kurzwellenlängenempfindliche Opsin 1, ein Zapfen-Photopigment, das 11-cis-Retinal bindet und in den Außensegmenten der Netzhautzapfen das blauempfindliche Sehpigment bildet. Nach Absorption eines Photons aktiviert OPN1SW über Transducin- und Phosphodiesterase-Signalwege die Zapfen-Phototransduktionskaskade, senkt dadurch den cGMP-Spiegel, moduliert zyklisch nukleotidgesteuerte Kanäle und prägt die Hyperpolarisation der Membran. Dieser Signalweg ist mit dem Transport in den Außensegmenten, der Regeneration des Chromophors und Prozessen der Lichtadaptation verknüpft, die durch die Unterstützung des retinalen Pigmentepithels koordiniert werden. Genetische Variationen oder eine Fehlregulation, die die Funktion von OPN1SW beeinträchtigen, wurden mit Unterschieden in der spektralen Empfindlichkeit der Zapfen in Verbindung gebracht und können zu Farbseh-Phänotypen beitragen, die für die Forschung zu erblichen Netzhauterkrankungen relevant sind.
OPN1SW Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des OPN1SW-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von OPN1SW abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die OPN1SW-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit OPN1SW-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.