OPG/Osteoprotegerin Double Nickase Plasmid (h): sc-400497-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das OPG/Osteoprotegerin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- OPG/Osteoprotegerin Double-Nickase-Plasmid (h) und OPG/Osteoprotegerin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TNFRSF11B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: OPG/Osteoprotegerin: sc-390518
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
OPG/Osteoprotegerin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400497-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPG/Osteoprotegerin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400497-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFRSF11B kodiert Osteoprotegerin (OPG), einen sezernierten „Decoy“-Rezeptor aus der TNF-Rezeptorsuperfamilie, der RANKL (TNFSF11) und TRAIL (TNFSF10) bindet und dadurch die Verfügbarkeit der Liganden sowie nachgeschaltete Signalübertragung moduliert. Durch die Antagonisierung der RANK–RANKL-Interaktion reguliert OPG Differenzierung und Aktivität von Osteoklasten und integriert Signale aus den NF-κB- und MAPK-Signalwegen, die den Knochenumbau und den Immun‑Crosstalk steuern. Über die Skelettbiologie hinaus ist OPG an vaskulärer Kalzifizierung sowie an der Signalübertragung zwischen Endothel und glatter Gefäßmuskulatur beteiligt, was seine Rolle an der Schnittstelle von Entzündung und Gewebehomöostase widerspiegelt. Eine fehlregulierte TNFRSF11B-Expression oder ein verändertes OPG/RANKL-Gleichgewicht wurde mit Phänotypen der Knochendichte, osteolytischen Prozessen und Mechanismen der kalzifizierenden Gefäßerkrankung in Verbindung gebracht, die für die translationale Forschung relevant sind.
OPG/Osteoprotegerin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TNFRSF11B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TNFRSF11B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TNFRSF11B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TNFRSF11B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.