Plásmido CRISPR de Activación (h) Oma1: sc-402953-ACT

El gen humano OMA1 codifica la metaloproteasa Oma1 de la membrana interna mitocondrial, un regulador sensible al estrés del control de calidad mitocondrial. Oma1 se activa por la despolarización mitocondrial y el estrés proteotóxico para procesar sustratos clave como OPA1, influyendo así en el equilibrio fusión–fisión mitocondrial, la arquitectura de las crestas y la capacidad de fosforilación oxidativa. Mediante su acoplamiento a las respuestas mitocondriales a proteínas mal plegadas, el inicio de la mitofagia y la señalización apoptótica, Oma1 integra el estrés bioenergético con la remodelación del orgánulo. La desregulación del eje OMA1–OPA1 se ha asociado con una dinámica mitocondrial alterada y se ha estudiado en contextos como la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y la adaptación al estrés en células cancerosas.

Oma1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OMA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Oma1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OMA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OMA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Oma1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OMA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Oma1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Oma1 en células tumorales con expresión de OMA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.