Olfr713 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-435112-ACT

Olfr713 (Maus) kodiert einen olfaktorischen Rezeptor aus der rhodopsinähnlichen Klasse‑A‑GPCR‑Superfamilie, der zur Geruchsstofferkennung und zur chemosensorischen Signaltransduktion in olfaktorischen Sinnesneuronen beiträgt. Nach Ligandenbindung koppeln olfaktorische Rezeptoren an heterotrimere G‑Proteine und regulieren dadurch die Adenylylcyclase‑Aktivität, die cAMP‑Produktion, das Öffnen zyklisch‑nukleotid‑gesteuerter Kanäle sowie die nachgeschaltete neuronale Depolarisation. Expression und Funktion von Olfr713 sind relevant für Studien zur Identität sensorischer Neuronen, zum Rezeptor‑Trafficking und zu GPCR‑Desensitisierungsmechanismen, die die olfaktorische Kodierung prägen. Eine Fehlregulation olfaktorischer Rezeptorwege wird in Modellen von Neuroinflammation, Neurodegeneration und Umweltexposition häufig als System‑Readout genutzt, da veränderte chemosensorische Signalgebung umfassendere Änderungen des neuronalen Zustands widerspiegeln kann.

Olfr713 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Olfr713-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Olfr713 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Olfr713-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Olfr713-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Olfr713-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Olfr713-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Olfr713-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Olfr713-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Olfr713-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.