Olfr45 Double Nickase Plasmid (m2): sc-422035-NIC-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Olfr45 Double Nickase Plasmid (m2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Olfr45 Double-Nickase-Plasmid (m2) und Olfr45 Double-Nickase-Plasmid (m22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Olfr45 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Olfr45 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen Olfr45 kodiert einen olfaktorischen Rezeptor aus der Superfamilie der G‑Protein‑gekoppelten Rezeptoren, der in der olfaktorischen Sinnesepithelie an der Erkennung von Duftstoffen und der Signaltransduktion beteiligt ist. Nach Ligandenbindung koppelt OLFR45 voraussichtlich an heterotrimere G‑Proteine und moduliert dadurch die Adenylatcyclase-Aktivität, die cAMP-Produktion sowie die nachgeschaltete Aktivierung von Ionenkanälen, was zur neuronalen Depolarisation und zur Einspeisung von Signalen in olfaktorische Schaltkreise führt. Veränderte Expression oder Signalgebung olfaktorischer Rezeptoren ist für Untersuchungen sensorischer Funktionsstörungen und allgemeiner Regulationsmechanismen von GPCR relevant, einschließlich Rezeptortransport (Trafficking), Desensibilisierung und transkriptioneller Kontrolle während der neuronalen Differenzierung. Geneditierung von Olfr45 ermöglicht funktionelle Genomik-Experimente, etwa zur Kartierung der Duftstoff‑Rezeptor‑Spezifität, zur Analyse von GPCR-Signalknoten in sensorischen Neuronen und zur Erzeugung von Mausmodellen, mit denen olfaktionsbezogene Phänotypen und die Homöostase des Neuroepithels untersucht werden können.
Olfr45 Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Olfr45-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Olfr45 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Olfr45-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Olfr45-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.