OLFM3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406216

Panoramica

OLFM3 (olfactomedina 3) codifica una glicoproteina secreta appartenente alla famiglia dei domini olfactomedina, localizzata nello spazio extracellulare e coinvolta nelle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. OLFM3 è stata collegata alla modulazione della segnalazione immunitaria e infiammatoria nei microambienti tissutali ed è associata a processi quali l’organizzazione della matrice extracellulare, l’adesione cellulare e la regolazione del comportamento delle cellule mieloidi. Un’alterata espressione di OLFM3 è stata riportata in molteplici contesti patologici, inclusi l’oncologia e le condizioni infiammatorie, dove può correlare con cambiamenti nel crosstalk tra tumore e sistema immunitario e nel rimodellamento dello stroma. Queste caratteristiche rendono OLFM3 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione del microambiente e sulle reti regolatorie extracellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OLFM3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OLFM3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OLFM3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OLFM3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OLFM3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OLFM3 per lo studio della segnalazione di OLFM3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OLFM3 critici per la funzione di OLFM3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OLFM3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OLFM3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OLFM3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OLFM3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OLFM3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OLFM3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OLFM3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OLFM3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.