Plásmido CRISPR de Activación (m) OLFM2: sc-434096-ACT

El gen **Olfm2** de ratón codifica la olfactomedina 2 (**OLFM2**), una glicoproteína secretada/asociada a la matriz extracelular (MEC) implicada en la regulación de las interacciones célula–célula y célula–matriz que determinan la organización tisular y la conectividad neuronal. OLFM2 se asocia con la remodelación de la matriz extracelular y con procesos de señalización que influyen en la adhesión, la migración y la diferenciación celulares, con especial relevancia para la biología del neurodesarrollo y la sinapsis. Estudios de expresión y función sitúan a OLFM2 en vías que controlan el crecimiento de neuritas y la maduración de circuitos, en las que cambios en las señales extracelulares pueden afectar la excitabilidad y la plasticidad. La desregulación de la actividad de OLFM2 se ha explorado en el contexto de fenotipos del sistema nervioso y de mecanismos de enfermedad más amplios que implican cambios en el microambiente extracelular, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en genómica funcional.

OLFM2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Olfm2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OLFM2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Olfm2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Olfm2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OLFM2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Olfm2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OLFM2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OLFM2 en células tumorales con expresión de Olfm2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.