OIP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409486-ACT

OIP5 (proteína 5 interatora de Opa) é um regulador conservado do ciclo celular, enriquecido nos centrômeros e intimamente ligado à segregação cromossômica e à progressão mitótica. Contribui para a função do cinetócoro/centrômero e favorece a montagem adequada do fuso mitótico, alinhando a atividade de OIP5 com redes centrais de controle da mitose que protegem a estabilidade genômica. A desregulação da expressão de OIP5 tem sido associada a estados proliferativos e é frequentemente estudada no contexto de aneuploidia, instabilidade cromossômica e biologia do câncer. Como fator ligado à proliferação, OIP5 também é utilizado como ponto de partida molecular para investigar programas transcricionais dependentes do ciclo celular e a regulação do checkpoint mitótico em células humanas.

OIP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OIP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OIP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OIP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OIP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OIP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OIP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OIP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OIP5 em células tumorais com expressão de OIP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.