OIP5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409486-ACT

OIP5 (Opa-interacting protein 5) ist ein konservierter Zellzyklusregulator, der an Zentromeren angereichert ist und eng mit der Chromosomentrennung sowie dem Fortschreiten der Mitose verknüpft ist. Es trägt zur Funktion von Kinetochor/Zentromer bei und unterstützt den korrekten Aufbau der Spindel, wodurch die OIP5-Aktivität in zentrale mitotische Kontrollnetzwerke eingeordnet ist, die die genomische Stabilität sichern. Eine fehlregulierte OIP5-Expression wurde mit proliferativen Zuständen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Aneuploidie, chromosomaler Instabilität und Krebsbiologie untersucht. Als mit Proliferation assoziierter Faktor dient OIP5 zudem als molekularer Ansatzpunkt, um zellzyklusabhängige Transkriptionsprogramme und die Regulation des mitotischen Checkpoints in menschlichen Zellen zu untersuchen.

OIP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OIP5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OIP5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OIP5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OIP5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OIP5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OIP5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OIP5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OIP5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OIP5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.