ODC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401055

Descripción general

ODC1 codifica la ornitina descarboxilasa (ODC), la enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de poliaminas que convierte la ornitina en putrescina, favoreciendo la producción de espermidina y espermina necesarias para la replicación del ADN, la organización de la cromatina y la traducción. La actividad de ODC está estrictamente regulada por la degradación mediada por antizima y se integra con el metabolismo de aminoácidos, la señalización de crecimiento vinculada a mTOR y la progresión del ciclo celular. La desregulación del metabolismo de poliaminas y la elevada expresión de ODC1 se asocian con frecuencia a fenotipos proliferativos, adaptación metabólica y programas transcripcionales oncogénicos, lo que convierte a ODC1 en un nodo útil para estudiar el control del crecimiento y las respuestas al estrés. La alteración de ODC1 también aporta información a la investigación sobre apoptosis, amortiguación del estrés oxidativo y señalización inmune o inflamatoria, donde las poliaminas modulan la expresión génica y la aptitud celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ODC (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ODC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ODC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ODC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ODC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ODC1 para la investigación de la señalización de ODC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ODC1 críticos para la función de ODC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ODC1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ODC CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ODC CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ODC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ODC (h) y el plásmido HDR ODC (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ODC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ODC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.