Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Oct3/4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400012-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Oct3/4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Oct3/4 Double-Nickase-Plasmid (h) und Oct3/4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf POU5F1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Oct3/4: sc-5279
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Oct3/4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400012-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Oct3/4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400012-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane POU5F1 kodiert den POU-Domänen-Transkriptionsfaktor Oct3/4, einen zentralen Regulator von Pluripotenz und Selbsterneuerung in embryonalen Stammzellen und induzierten pluripotenten Stammzellen. Oct3/4 wirkt innerhalb eines eng vernetzten transkriptionellen Netzwerks mit Faktoren wie SOX2 und NANOG, um Linienfestlegung, Chromatinzugänglichkeit und frühe entwicklungsbezogene Genprogramme zu steuern. Seine Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die den Stammzellzustand beeinflussen, darunter TGF-β/SMAD, WNT/β-Catenin und FGF/ERK, und koordiniert dadurch Signale für Proliferation und Differenzierung. Eine aberrante POU5F1-Expression ist mit stamzellassoziierten Transkriptionsprogrammen in mehreren Krebsarten verbunden und wird weithin als Marker undifferenzierter Zellen sowie der Reprogrammierungseffizienz verwendet.
Oct3/4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des POU5F1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von POU5F1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die POU5F1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit POU5F1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.