Plásmido CRISPR de Activación (m) OCT2: sc-422991-ACT

Slc22a2 codifica el transportador de cationes orgánicos 2 (OCT2), un transportador de solutos polispecífico que se expresa predominantemente en el epitelio del túbulo proximal renal, donde media la captación basolateral desde la circulación de aminas endógenas y de diversos xenobióticos. OCT2 modula la secreción renal al acoplarse con transportadores de eflujo apicales e influye en el manejo celular de metabolitos catiónicos, afectando así la exposición intracelular y las respuestas al estrés en el tejido renal. Debido a su papel central en redes de transporte que controlan la farmacocinética y el aclaramiento metabólico, la actividad alterada de Slc22a2 es relevante para estudios de nefrotoxicidad, interacciones fármaco–fármaco y variabilidad interindividual en el destino de los compuestos. En modelos murinos, OCT2 se investiga con frecuencia para vincular la función del transportador con la fisiología renal, la sensibilidad a tóxicos y la homeostasis sistémica de metabolitos.

OCT2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Slc22a2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OCT2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Slc22a2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Slc22a2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OCT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Slc22a2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OCT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OCT2 en células tumorales con expresión de Slc22a2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.