OCT2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422991-ACT

Slc22a2 kodiert den organischen Kationentransporter 2 (OCT2), einen polyspezifischen Solute-Carrier-Transporter, der überwiegend im Epithel des proximalen Nierentubulus exprimiert wird und dort die basolaterale Aufnahme endogener Amine sowie vielfältiger Xenobiotika aus dem Blutkreislauf vermittelt. OCT2 prägt die renale Sekretion durch die Kopplung mit apikalen Effluxtransportern und beeinflusst den zellulären Umgang mit kationischen Metaboliten, wodurch die intrazelluläre Exposition und Stressantworten im Nierengewebe mitbestimmt werden. Aufgrund seiner zentralen Rolle in Transporternetzwerken, die Pharmakokinetik und metabolische Clearance steuern, ist eine veränderte Slc22a2-Aktivität relevant für Studien zu Nephrotoxizität, Arzneimittelwechselwirkungen und interindividueller Variabilität der Stoffverteilung. In Mausmodellen wird OCT2 häufig untersucht, um die Transporterfunktion mit Nierenphysiologie, Empfindlichkeit gegenüber Toxinen und der systemischen Metabolithomöostase in Verbindung zu bringen.

OCT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Slc22a2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OCT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Slc22a2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Slc22a2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OCT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Slc22a2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OCT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OCT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Slc22a2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.