Plasmide CRISPR d'Activation (h) Oct-1: sc-401156-ACT

Le gène humain **POU2F1** code le facteur de transcription à domaine POU **Oct-1**, un régulateur exprimé de manière ubiquitaire qui se lie à des motifs octamériques pour coordonner des programmes d’expression génique basaux et induits par des stimuli. Oct-1 participe au contrôle transcriptionnel médié par l’ARN polymérase II, au remodelage de la chromatine et à l’intégration, dépendante du contexte, de signaux influençant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress cellulaire. Par ses interactions avec des éléments promoteurs et amplificateurs (enhancers), il contribue à ajuster des voies liées à la régulation des gènes de l’immunité et de l’inflammation, aux réponses aux dommages de l’ADN et à l’adaptation métabolique. Une activité d’Oct-1 dérégulée et des profils d’expression modifiés de **POU2F1** ont été associés à des changements de réseaux transcriptionnels observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment des phénotypes oncogéniques et immunitaires, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation génique.

Oct-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POU2F1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Oct-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POU2F1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POU2F1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Oct-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POU2F1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Oct-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Oct-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de POU2F1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.