OC-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-434195

Descripción general

Onecut3 (OC-3) es un factor de transcripción homeobox de la familia ONECUT en ratón que se une a motivos específicos de ADN para coordinar decisiones sobre el destino celular y el patrón tisular durante el desarrollo. Contribuye a programas de regulación génica implicados en la diferenciación, la morfogénesis y el mantenimiento de identidades celulares especializadas, integrándose en redes transcripcionales más amplias que dirigen la organogénesis. Como regulador nuclear, OC-3 influye en vías posteriores que gobiernan la especificación y maduración de linajes, lo que lo hace relevante para estudios de biología del desarrollo y del control epigenético de la transcripción. En la literatura, se ha vinculado la desregulación de programas transcripcionales asociados a Onecut3 con estados de diferenciación alterados y fenotipos relevantes para enfermedades en sistemas modelo en los que las vías del desarrollo están perturbadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OC-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Onecut3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Onecut3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Onecut3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OC-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Onecut3 para la investigación de la señalización de OC-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Onecut3 críticos para la función de OC-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Onecut3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OC-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OC-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Onecut3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OC-3 (m) y el plásmido HDR OC-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Onecut3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Onecut3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.