OC-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406357

Descripción general

ONECUT3 codifica el factor de transcripción OC-3, un miembro de la familia onecut caracterizada por un dominio CUT y un dominio homeobox de unión al ADN que coordinan programas de expresión génica específicos de tejido. OC-3 contribuye a la regulación de la diferenciación celular y la especificación de linajes al controlar redes transcripcionales que moldean estados de desarrollo y metabólicos. En biología humana, los patrones de expresión de ONECUT3 se han vinculado con la modulación de los circuitos reguladores de genes epiteliales y hepáticos y con un control transcripcional más amplio de vías relacionadas con la organogénesis. La actividad desregulada de la familia onecut se ha estudiado en el contexto de alteraciones en la diferenciación, la proliferación y la reprogramación transcripcional asociada a tumores, lo que respalda su uso como un nodo para estudios mecanísticos de redes génicas relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OC-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ONECUT3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ONECUT3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ONECUT3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OC-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ONECUT3 para la investigación de la señalización de OC-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ONECUT3 críticos para la función de OC-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ONECUT3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OC-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido OC-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ONECUT3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OC-3 (h) y el plásmido HDR OC-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ONECUT3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ONECUT3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.