OC-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432551

Descripción general

Onecut2 (OC-2) es un factor de transcripción homeobox de ratón que coordina la especificación del destino celular y el patrón de los tejidos durante el desarrollo, con funciones destacadas en la neurogénesis y la diferenciación de órganos. Al unirse a elementos reguladores del ADN, OC-2 modula programas transcripcionales que se intersectan con redes determinantes de linaje que controlan la proliferación, la diferenciación y la identidad regional. La actividad de la familia Onecut contribuye al mantenimiento de la identidad celular y a la maduración en múltiples contextos epiteliales y neuronales. La expresión desregulada de ONECUT2 se ha asociado con estados de diferenciación alterados y con circuitería transcripcional oncogénica en varios tipos de tumores, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en estudios de biología del desarrollo y del cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OC-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Onecut2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Onecut2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Onecut2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OC-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Onecut2 para la investigación de la señalización de OC-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Onecut2 críticos para la función de OC-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Onecut2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OC-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OC-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Onecut2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OC-2 (m) y el plásmido HDR OC-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Onecut2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Onecut2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.