Plásmido CRISPR de Activación (h) OB-cadherin: sc-401051-ACT

CDH11 codifica la OB-cadherina, una cadherina clásica que media la adhesión homofílica célula–célula dependiente de Ca²⁺ y favorece la morfogénesis tisular, la cohesión mesenquimal y la organización del estroma. La interacción de la OB-cadherina se enlaza con las cateninas y el citoesqueleto de actina, influyendo en la estabilidad de las uniones, la mecanotransducción y la señalización dependiente del contacto, que converge con vías como Wnt/β-catenina y la dinámica del citoesqueleto regulada por las GTPasas Rho. En biología humana, CDH11 se asocia de forma destacada con programas de linaje de fibroblastos y osteoblastos y contribuye a la remodelación de la matriz extracelular y a fenotipos migratorios. Se ha descrito expresión desregulada de CDH11 en contextos que incluyen fibrosis, activación estromal relacionada con artritis e interacciones tumor–estroma, lo que lo hace relevante para estudios de señalización dependiente de adhesión y regulación del microambiente.

OB-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OB-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OB-cadherin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OB-cadherin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OB-cadherin en células tumorales con expresión de CDH11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.